De Grondprinzip vun der DNA Synthese

Déi chemesch DNA Synthese baséiert op der Solidphase Synthesestrategie a Phosphoramiditchemie.Ënnerscheed vun der biologescher DNA Synthese, ass d'Material an der chemescher DNA Synthese DMT (4, 4-dimethoxytrityl) a Phosphoramidit modifizéiert Deoxyriboxyside, wéi an der Figur 1 gewisen.Oligo Synthese Kolonn), also CPG (kontrolléiert Pore Glas) a PS (Polystyrol), an déi ganz Synthese gëtt op engemDNA / RNA Synthesizer, wat eis Haaptausrüstung ass, huet verschidde Modeller wéi: HY Single Channel Synthesizer, HY-12, HY-192 an etc. Synthese Zyklus.En typesch Syntheszyklus enthält véier Schrëtt, Entschutz, Kupplung, Kappen an Oxidatioun (Figur 2).D'Deprotectioun ass agestallt fir d'DMT Grupp op der zolitter Ënnerstëtzung oder der 5' Hydroxylgrupp op der viregter Nukleosid ze entfernen, déi 3% Trichloracetic Seier am Dichloromethan gëtt als Entschutzreagens benotzt.Duerno gouf de Phosphoramidit modifizéierten Deoxyriboxysid erlaabt d'Hydroxylgrupp mat der Hëllef vum Aktivator ze beliichten, dh 5-ethylthiotetrazol oder 4, 5-dicyanoimidazol, déi de Phosphitetriester (III) bilden, an d'Koppelschrëtt realiséiert.E Capping Schrëtt gëtt duerchgefouert fir déi onreagéiert Hydroxylgrupp wärend der Kopplungsschrëtt ze blockéieren, fir d'Bildung vun ongewollten Defektsequenzen ze minimiséieren.Schlussendlech gëtt den onbestännegen Phosphitetriester (III) zu chemesche stabile Phosphortriester (V) oxidéiert mat Jod als Oxidant am Moment vu Pyridin.

D'synthetiséiert DNA kéint aus der fester Ënnerstëtzung duerch Aminolyse ofgeschnidden ginn, d'2-Cyanoethyl-geschützte Grupp op der Phosphortriester an d'Amide op der Nukleobase gëtt zur selwechter Zäit gespléckt, d'Syntheseplaten an d'Synthesekolonnen an de Racken ginn direkt an der Reaktiounskammer gesat. vunDeprotection Equipement.Crude DNA kéint vun HPLC virbereet ginn, electrophoresis an OPC op Nofro, mir kënnen Iech och déiPurification Equipementfir Postveraarbechtung.