D'Nukleinsäuresynthese gëtt mat der Solidphase Sialic Amide Triglyceride Method duerchgefouert, woubäi den 3'Enn vun der DNA op engem Festphase Substrat immobiliséiert gëtt an Nukleotiden an der 3' bis 5' Richtung bäigefüügt ginn bis de gewënschten DNA Fragment synthetiséiert ass. .Dëst ënnerscheet sech vun der DNA Synthese duerch d'Applikatioun vun DNA Polymerase.
Den 3'-Enn vun der éischter Basis gëtt op CPG während der Synthese immobiliséiert, de 5'-OH vun der nächster Basis ass geschützt mat Di-p-tolyl Trityl DMT, d'Aminogrupp op der Basis ass mat Benzoinsäure geschützt an den 3' -OH gëtt dann mat enger Aminophosphatverbindung aktivéiert.1 Base vun de 5 5'-OH vun 1 Base an 3'-OH vun der nächster Base bilden e Phosphit-Triglycerid, deen dann mat Jod zu engem Phosphat-Triglycerid oxidéiert gëtt, de Schutzmëttel op der zweeter Basis 5'-OH gëtt duerch addéieren dichloracetic sauerem DM Zyklen duerch d'Additioun vun der nächster Basis, an no der Synthese de Protectant op der 5'-OH mat enger schwaacher Säure geläscht. mat konzentréiert Ammoniumhydroxid ënner Heizung gëtt den Ammoniumhydroxid ewechgeholl, d'Fragment gëtt Vakuum gedréchent, an d'Nukleinsäure gëtt duerch Flëssegchromatographie oder PAGE gereinegt.
Schrëtt vun der Oligo Synthese
Deblockéieren
Déi5 Enn DMT Schutzgrupp gëtt geläscht andeems TCA Léisung bäigefüügt gëtt.
Aktivatioun
Mëschung vum Aktivator mam Oligonukleotidmonomer fir den aktiven Oligonukleotidmonomer Zwëschenzäit ze bilden.
Kopplung
Déi 5-terminal Hydroxylgrupp reagéiert mam aktive Oligonukleotid-Zwëschenprodukt an enger antigenerativer Kondensatiounsreaktioun fir eng onbestänneg Phosphit-Triglyceridbindung ze bilden.
Kappen
D'Zousatz vun engem Capping Agent mécht eng Acetylatioun Capping Reaktioun mat iwwerschësseg Hydroxylgruppen, déi net an der Kondensatiounsreaktioun involvéiert sinn.
Oxidatioun
D'Zousatz vun Jodléisung mat Waasser reagéiert mat onbestänneg Phosphitbindungen duerch Oxidatioun fir stabil Phosphorsäure Triglyceridbindungen ze bilden.
Cyanoethyl Spaltung
D'Nukleinsäureprodukt no der Synthese, mat der Zousatz vun der DEA Léisung fir d'Cyanoethylgrupp aus der Phosphattriglyceridbindung ze entfernen.
Geklomm & Entschutz
D'Nukleinsäurefragmenter ginn aus dem Festphase-Träger ofgeschnidden andeems eng konzentréiert Ammoniumhydroxid-Léisung bäigefüügt gëtt an duerno erhëtzt fir d'Schutzgruppen aus de Waasserstoffbindunge vun de Basen ze entfernen.
Post Zäit: Nov-21-2022